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营养琼脂(NA)

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SS0101营养琼脂(Nutrient Agar)
用    途： 一般细菌总数测定，保存菌种及纯培养。（《中华人民共和国药典》2005年版）
原    理： 蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
配方（每升）：
蛋白胨 10.0g
牛肉膏粉 3.0 g
氯化钠 5.0g
琼脂 14.0g
最终pH 7.2±0.2
使用方法：
1、   称取本品32.0g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、   (食品)以无菌操作称取检样25.0克（或25.0mL），放入含有225.0mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中（瓶内预置适当数量的玻璃珠），充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。
3、   根据对样品污染情况的估计，选择2～3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1.0mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、   稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15.0mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
5、   观察结果。
6、   菌落计数方法：
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
7、   菌落计数的报告：                                                
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长 时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2 以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落 计。
A：稀释度的选择：
应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。
若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，则应报告其平均数；若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3)。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。
若有稀释度的平均菌菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。
菌落数的报告：
    菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。

稀释度选择及菌落数报告方式
例次 		稀释液及菌落数     两稀释液之比 菌落总数个/g或mL 报告方式个/g或mL
  10-1 10-2 10-3      
1 多不可计 164 20 —— 16 400 16 000或1.6×104
2 多不可计 295 46 1.6 37 750 3 8000或3.8×104
3 多不可计 271 602.2 —— 27 100 27 000或2.7×104
4 多不可计 多不可计 313 —— 31 300 31 0000或3.1×105
5 27 11 5  —— 270 270或2.7×102
6 0 0 0  —— ＜1×10 ＜10
7 多不可计 305 12 —— 30 500  31 000或3.1×104
 
质量控制：
          本品接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下：

菌   名 		菌   号 生长状况  菌落特征
大肠埃希氏菌 ATCC25922 良好
白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。
                                    
金黄色葡萄球菌 ATCC6538 良好 黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明。
 
贮   存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期二年。
 
规   格：250g